凝胶净化色谱仪的使用规范细节

　　凝胶净化色谱仪是一种基于分子筛效应的高效液相色谱技术，广泛应用于高分子材料分析、食品检测、药品纯化等领域。以下从原理、操作流程及维护要点等方面综合阐述其使用要点：

　　一、基本原理与核心组件

　　分离机制：以多孔凝胶为固定相，利用分子体积差异实现分离。大分子无法进入凝胶孔道，直接流出色谱柱；小分子则因扩散进入孔内而滞留更久。该技术特别适用于去除复杂基质中的大分子杂质(如蛋白质、油脂等)，提升目标物检测精度。

　　仪器组成：包括溶剂贮存器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器及数据系统。其中，检测器分为浓度型(如紫外检测器)和分子量型(如光散射检测器)。

　　二、流动相的准备与优化

　　纯度要求：需选用色谱纯及以上级别的溶剂(如四氢呋喃、环己烷-乙酸乙酯混合液)，避免杂质干扰分离效果。腐蚀性溶剂(如卤代烃)需谨慎使用，防止损坏不锈钢管路。

　　过滤脱气：流动相应通过0.45μm滤膜过滤，并超声脱气，以防止气泡堵塞管路或影响基线稳定性。

　　配制比例：严格遵循色谱柱标签标注的溶剂比例，错误配比可能导致柱效下降甚至填料变形。例如，聚苯乙烯凝胶柱常用四氢呋喃作为流动相。

　　三、样品处理的关键步骤

　　溶解与过滤：样品应尽量用流动相溶解，减少溶剂极性差异对分离的影响。进样前需经0.45μm滤膜过滤，防止颗粒物污染色谱柱。对于高粘度样品，可适当稀释以避免超载。

　　除尘要求：在激光光散射实验中，需对样品进行严格除尘处理。配置测试样品的溶剂应进行精馏，并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。

　　四、系统操作规范

　　开机与平衡：依次开启仪器电源，待检测器自检完成后启动工作站软件。新柱或长期未用的柱子需用流动相冲洗30分钟以上以平衡柱效。若出现压力异常升高，应立即停机检查管路是否堵塞。

　　方法设置：根据目标物分子量范围选择合适校正曲线范围，确保样品处于线性响应区间。编辑批表时需核对流速(通常5mL/min)、进样体积等参数。

　　洗脱收集：按预设程序自动收集目标组分，注意避开杂质峰。对于复杂基质(如动植物提取物)，可采用分段收集策略提高纯度。

　　五、日常维护与故障排查

　　色谱柱保养：实验结束后及时清洗柱子，先用强洗脱能力溶剂(如甲醇-丙酮混合液)反向冲洗保护柱，再用纯流动相正向冲洗至基线平稳。长期不用时应卸下两端密封保存。

　　管路清洁：针对有色样品(如茶叶提取物)，每隔半个月拆下色谱柱，改用不锈钢两通连接管路，并用甲醇-丙酮(1:1)冲洗1小时，避免色素沉积影响回收率。

　　废液管理：定期倾倒废液瓶，防止溢出造成环境污染或腐蚀设备。

　　六、安全注意事项

　　禁止在高压状态下拆卸色谱柱，以防喷溅伤人。

　　更换溶剂时务必排空管路气泡，否则会导致流量波动。

　　实验室保持通风良好，有机溶剂挥发可能引发火灾风险。